Á¦ÇÑÈ¿¼Ò
¿öµå ÇÁ·Î¼¼¼¸¦ »ç¿ëÇÏ¿© ¹®¼¸¦ ÆíÁýÇÒ ¶§ ¹®¼¸¦ ÀÚ¸£°í ºÙÀÌ´Â °Íó·³ DNAµµ ƯÁ¤ºÎÀ§¸¦ ÀÚ¸£°í ºÙÀÏ ¼ö ÀÖ´Ù. DNA¸¦ ÀÚ¸¥´Ù´Â °ÍÀº nucleotideµéÀÌ ¿¬°áµÇ¾î ÀÖ´Â phosphodiester °áÇÕÀ» ²÷¾î³»´Â °ÍÀ» ÀǹÌÇϴµ¥, ÀÌ·± ¿ªÇÒÀ» ÇÏ´Â È¿¼Ò¸¦ nuclease¶ó°í ÇÏ¸ç ¹Ù±ùÂÊÀ» ÀÚ¸£´Â°¡ ¾ÈÂÊÀ» ÀÚ¸£´Â°¡¿¡ µû¶ó¼ °¢°¢ exonuclease, endonuclease¶ó°í ºÎ¸¥´Ù. EndonucleaseÀÇ ´ëÇ¥ÀûÀÎ °ÍÀÌ ¹Ù·Î Á¦ÇÑÈ¿¼Ò(restriction enzyme, restriction endonuclease)À̸ç, DNA¿¡ Á¸ÀçÇϴ ƯÁ¤ÇÑ ¿°±â¼¿À» ÀνÄÇÏ°í ÀνÄÇÑ ¼¿ºÎÀ§ ¶Ç´Â ±× ±Ùó¿¡ Á¸ÀçÇϴ ƯÁ¤ºÎÀ§¸¦ Àý´ÜÇÑ´Ù. Á¦ÇÑÈ¿¼Ò´Â ¿ø·¡ ¼¼±ÕÀÌ ÀÚ½ÅÀÇ ¼¼Æ÷ ³»·Î ħÀÔÇØ µé¾î¿À´Â ¹ÙÀÌ·¯½º¿Í °°Àº ¿ÜºÎ DNA¸¦ Á¦°ÅÇϱâ À§ÇÑ ¹æ¾î±âÀüÀ¸·Î °¡Áö°í ÀÖ´Â °ÍÀ̸ç, ÀÚ½ÅÀÇ DNA´Â Àý´ÜºÎÀ§ÀÇ ¿°±â(adenine, cytosine)¸¦ ¸ÞÄ¥È ½ÃÄѼ ÀÚ½ÅÀÇ Á¦ÇÑÈ¿¼Ò°¡ ÀÚ½ÅÀÇ DNA¸¦ ÀÚ¸¦ ¼ö ¾ø°Ô º¸È£ÇÏ°í ÀÖ´Ù.
Á¦ÇÑÈ¿¼Ò´Â 3°¡Áö·Î ³ª´ ¼ö ÀÖÀ¸¸ç, ½ÇÇè½Ç¿¡¼ »ç¿ëµÇ´Â °ÍÀº ´ëºÎºÐ type IIÀÌ´Ù.
1) Type I restriction enzyme
DNAÀÇ Æ¯Á¤ºÎÀ§¸¦ ÀνÄÇϱä ÇÏÁö¸¸ ÀÎ½ÄµÈ ºÎÀ§°¡ ¾Æ´Ñ ´Ù¸¥ ºÎÀ§¸¦ Àý´ÜÇÑ´Ù. Áï, ÀνĺÎÀ§´Â ƯÀ̼ºÀ» °¡ÁöÁö¸¸ ±×·ÎºÎÅÍ ¾à 1,000 base pair°¡ ¶³¾îÁø ºÎÀ§¸¦ Àý´ÜÇϱ⠶§¹®¿¡ ¿øÇÏ´Â ºÎÀ§¸¦ ¼±ÅÃÇÏ¿© ÀÚ¸£±â°¡ ¾î·Æ´Ù. µû¶ó¼ ÀÌ È¿¼ÒµéÀº ¹ÚÅ׸®¾ÆÀÇ ±â´É¿¡´Â Áß¿äÇÏÁö¸¸ ½ÇÇè¸ñÀûÀ¸·Î´Â Àß »ç¿ëµÇÁö ¾Ê´Â´Ù.
2) Type II restriction enzyme
ÀνĺÎÀ§¿Í Àý´ÜºÎÀ§°¡ ¸ðµÎ ƯÀ̼ºÀÌ ÀÖ´Â Á¦ÇÑÈ¿¼ÒÀ̹ǷΠºÐÀÚ»ý¹°ÇÐ ¿¬±¸¿¡ ¾ÆÁÖ À¯¿ëÇÏ°Ô ÀÌ¿ëµÇ°í ÀÖ´Ù. ½ÇÇè¿¡ ¾²ÀÌ´Â Á¦ÇÑÈ¿¼Ò´Â Ưº°ÇÑ ¸»ÀÌ ¾ø´Â ÇÑ type II¸¦ ¸»ÇÑ´Ù. ´ëºÎºÐÀÇ type II Á¦ÇÑÈ¿¼Ò´Â 4°³, 5°³, ¶Ç´Â 6°³ÀÇ ¿°±â¼¿À» ÀνÄÇϴµ¥, ÀÌ¿¡ µû¶ó DNA »ó¿¡ ÀνĺÎÀ§°¡ ³ªÅ¸³ª´Â ºóµµ°¡ ´Þ¶óÁö°Ô µÈ´Ù. Áï 6°³ÀÇ ¿°±â¼¿À» ÀνÄÇÑ´Ù¸é À̷лó 46 = 4096 base pair ¸¶´Ù Çѹø¾¿ ÃâÇöÇÏ°Ô µÈ´Ù. Á¦ÇÑÈ¿¼ÒÀÇ ¸í¸íÀº ¹ß°ßµÈ ¼¼±ÕÀÇ À̸§ ¹× serotype¿¡ µû¶ó¼ ºÙÀÌ°Ô µÈ´Ù. Áï Hinf II´Â Haemophilus influenza type f¿¡¼ ºÐ¸®µÈ °ÍÀÌ´Ù.
Á¦ÇÑÈ¿¼Ò°¡ ÀνÄÇÒ ¼ö ÀÖ´Â ºÎÀ§´Â palindrome, Áï ¾ÕÀ¸·Î ÀÐÀ¸³ª µÚ·Î ÀÐÀ¸³ª ¿°±â¼¿ÀÌ °°Àº ¸ð¾çÀ» ÇÏ°í ÀÖ´Â °ÍÀÌ Æ¯Â¡ÀÌ´Ù. À߸° ÈÄÀÇ DNA ¸ð¾çÀº 5'-overhang cohesive end, 3'-overhang cohesive end(sticky end) ¶Ç´Â blunt end°¡ ¸¸µé¾îÁú ¼ö ÀÖÀ¸¹Ç·Î ¸ñÀû¿¡ µû¶ó¼ Àß ¼±ÅÃÇؼ »ç¿ëÇØ¾ß ÇÑ´Ù.
¿¹1) Eco RI È¿¼ÒÀÇ Àý´Ü ºÎÀ§: 5'-overhang cohesive end Çü¼º
5'--GAATTC--3' ? 5'--G AATTC--3'
3'--CTTAAG--5' 3'--CTTAA G--5'
¿¹2) Sac I È¿¼ÒÀÇ Àý´Ü ºÎÀ§: 3'-overhang cohesive end Çü¼º
5'--GAGCTC--3' ? 5'--GAGCT C--3'
3'--CTCGAG--5' 3'--C TCGAG--5'
¿¹3) Sma I È¿¼ÒÀÇ Àý´Ü ºÎÀ§: blunt end Çü¼º
5'--CCCGGG--3' ? 5'--CCC GGG--3'
3'--GGGCCC--5' 3'--GGG CCC--5'
3) Type III restriction enzyme
ÀνÄÇÑ DNA ºÎÀ§¿¡¼ ¾î´À Á¤µµ ¶³¾îÁø ºÎÀ§¸¦ Àý´ÜÇÑ´Ù. ºÐÀÚ»ý¹°ÇÐ ½ÇÇè¿¡´Â Àß »ç¿ëµÇÁö ¾Ê°í ÀÖ´Ù.
A. Á¦ÇÑÈ¿¼Ò¸¦ ÀÌ¿ëÇÑ DNAÀÇ Àý´Ü
Á¦ÇÑÈ¿¼Ò 1 unit´Â 1 mgÀÇ DNA¸¦ ÃÖÀû ¿Âµµ¿¡¼ ÇÑ ½Ã°£¿¡ Àý´ÜÇÒ ¼ö ÀÖ´Â ¾çÀÌ´Ù. »óÇ°ÈµÈ È¿¼Ò´Â È¿¼Ò¸¶´Ù ´Ù¸£Áö¸¸ ´ë°³ 10 units/ml ³»¿ÜÀÇ ³óµµ·Î °ø±ÞµÈ´Ù.
Á¦ÇÑÈ¿¼Ò ó¸® ¹ÝÀÀÀº Àý´ÜÇÏ·Á°í ÇÏ´Â DNA, ¹ÝÀÀ¿ÏÃæ¿ë¾×, Á¦ÇÑÈ¿¼Ò·Î ±¸¼ºµÈ´Ù. °¢°¢ÀÇ ¼ººÐ¿¡ ´ëÇÏ¿© ´ÙÀ½°ú °°Àº Á¡µéÀ» °í·ÁÇÏ¿©¾ß ÇÒ °ÍÀÌ´Ù.
1) ÀÚ¸¦ DNA ³»¿¡ Á¦ÇÑÈ¿¼Ò·Î À߸®´Â ºÎÀ§°¡ ¸î °³°¡µÇ´ÂÁö ÆľÇÇÑ´Ù. °°Àº ¾çÀÇ DNA¿¡ Á¦ÇÑÈ¿¼Ò Àý´ÜºÎÀ§°¡ ¹«¼öÈ÷ ¸¹À» ¼öµµ ÀÖ°í ¾øÀ» ¼öµµ ÀÖÀ¸¸ç, ÀÌµé °æ¿ì¿¡ °°Àº ¾çÀÇ È¿¼ÒÀÛ¿ëÀ» ±â´ëÇÒ ¼ö ¾øÀ» °ÍÀÌ´Ù. ±×·¯³ª º¸Åë ½ÇÇè¿¡¼´Â °è»êµÈ ¾çº¸´Ù ´õ ¸¹Àº È¿¼Ò¸¦ ³Ö¾îÁֱ⠶§¹®¿¡ ±×´ÙÁö °ÆÁ¤ÇÒ ÇÊ¿ä´Â ¾ø´Ù.
2) Linear DNAÀÇ ³¡ºÎºÐÀ» ÀÚ¸¦ ¶§´Â, È¿¼Ò¿¡ µû¶ó¼ Àνļ¿¿¡ ¸î °³ÀÇ ¿°±â°¡ ´õ ºÙ¾î ÀÖ¾î¾ß¸¸ À߸®´Â °ÍµéÀÌ ÀÖÀ½À» ÁÖÀÇÇÑ´Ù. ÀÌ´Â plasmid vectorÀÇ multiple cloning site¸¦ µÎ°¡Áö È¿¼Ò·Î ÀÚ¸£´Â °æ¿ì¿¡µµ °í·ÁÇØ¾ß ÇÑ´Ù.
¶ÇÇÑ PCR primer¿¡ Á¦ÇÑÈ¿¼Ò ÀνĺÎÀ§¸¦ ³Ö¾î designÇÒ °æ¿ì¿¡µµ ¹Ýµå½Ã °í·ÁÇØ¾ß ÇÑ´Ù.
3) DNAÀÇ ¼ø¼öµµ´Â Á¦ÇÑÈ¿¼Ò ó¸® È¿À²¿¡ Áß¿äÇÏ´Ù. DNA ¿ë¾× ³»¿¡ ´Ü¹éÁúÀÌ ³²¾ÆÀÖ´Â °æ¿ì´Â º¸´Ù ¸¹Àº ¾çÀÇ È¿¼Ò°¡ ÇÊ¿äÇÏ´Ù. Phenol°ú °°Àº À¯±â¿ë¸Å°¡ ³²Àº °æ¿ì´Â Á¦ÇÑÈ¿¼Ò¿¡ À߸®Áö ¾Ê´Â DNA°¡ ³²´Â °æ¿ì°¡ ¸¹´Ù.
4) °¢°¢ÀÇ Á¦ÇÑÈ¿¼Ò´Â ÃÖÀû¿Âµµ, ¹ÝÀÀ¿ÏÃæ¿ë¾×(reaction buffer)ÀÇ Á¶¼º ¹× ºÒ È°¼ºÈ ¿Âµµ µî °¢°¢¿¡ ¾Ë¸ÂÀº ¹ÝÀÀ Á¶°ÇÀÌ ÀÖÀ¸¸ç, Á¦Á¶È¸»çÀÇ ¾È³»¼¿¡ ÀÌ ³»¿ëÀÌ Àß ±â·ÏµÇ¾î ÀÖÀ¸¹Ç·Î Àß Àо°í »ç¿ëÇØ¾ß ÇÑ´Ù. ¾î´À ȸ»çÀÇ Á¦Ç°ÀÌ°Ç È¿¼Ò¸¦ ±¸ÀÔÇÒ ¶§ ±× È¿¼Ò¿¡ ÀûÇÕÇÑ ¹ÝÀÀ¿ÏÃæ¿ë¾×ÀÌ °°ÀÌ Áö±ÞµÇ¹Ç·Î º° ¾î·Á¿ò ¾øÀÌ ±×´ë·Î »ç¿ëÇÒ ¼ö ÀÖÀ¸¸ç ´ë°³ 10¹è ³óÃàµÈ ÇüÅÂ(10x)·Î ¸¸µé¾îÁ® ÀÖÀ¸¹Ç·Î ¹ÝÀÀ¾×À» Á¶ÇÕÇÒ ¶§ 10¹è Èñ¼®ÇÏ´Â ÇüÅ·Π¹ÝÀÀ¾×À» Á¶¼ºÇÑ´Ù.
5) ¹ÝÀÀ Á¶°ÇÀÌ ÃÖÀûÀÌ ¾Æ´Ñ °æ¿ì¿¡´Â ´õ ¸¹Àº ¾çÀÇ È¿¼Ò¸¦ »ç¿ëÇØ¾ß ÇÑ´Ù. ÀÌ´Â µÎ °¡Áö ÀÌ»óÀÇ È¿¼Ò·Î ÀÚ¸£´Â °æ¿ì (È¿¼ÒµéÀÇ ÃÖÀû Á¶°ÇÀÌ ´Ù¸¦ ¶§)¿¡ Áß¿äÇÏ´Ù. ¶§¿¡ µû¶ó¼´Â ÀÌ·± °æ¿ì¿¡ star activity¶ó ºÒ¸®´Â Çö»ó(ºñ ƯÀÌÀûÀ¸·Î ¾Æ¹« °÷À̳ª ´Ù À߸®´Â Çö»ó)ÀÌ ³ªÅ¸³¯ ¼öµµ ÀÖÀ¸¹Ç·Î ÁÖÀÇÇØ¾ß ÇÑ´Ù.
6) È¿¼Ò°¡ ÀνĺÎÀ§¸¦ ÀÚ¸£´Â µ¥¿¡ ÀÖ¾î¼ °°Àº ÀνĺÎÀ§¶óµµ ÁÖÀ§ ¿°±â¼¿¿¡ µû¶ó ±× È°¼ºµµ°¡ ´Ù¸¦ ¼ö ÀÖ´Ù.
±×·¯¹Ç·Î, DNA ¾çÀ¸·Î °è»êÇÑ È¿¼Ò ¾çº¸´Ù Á¶±Ý ´õ ¸¹ÀÌ ³Ö¾îÁÖ´Â °ÍÀÌ ÁÁ´Ù. ÇÊ¿äÇÒ ¶§´Â Á¦ÇÑÈ¿¼Ò ó¸® Áß¿¡ Á¶±Ý¾¿ ´ú¾î Àü±â¿µµ¿À¸·Î monitorÇÒ ¼öµµ ÀÖ´Ù.
½ÇÇè¹æ¹ý
1. ¹Ì¼¼ ¿øħ°ü¿¡ micropipetteÀ¸·Î ´ÙÀ½°ú °°ÀÌ ³Ö´Â´Ù.
Àý´ÜÇÏ°íÀÚ ÇÏ´Â DNA 5 mg
10x ¹ÝÀÀ¿ÏÃæ¿ë¾× 2 ml
Bam HI Á¦ÇÑÈ¿¼Ò (10 units/ml) 1 ml
Áõ·ù¼ö up to 20 ml
u À§¿Í °°Àº È¥ÇÕ¹°À» ½ÃÇè°ü¿¡ ³ÖÀ» ¶§¿¡´Â º¸Åë È¿¼Ò¸¦ °¡Àå ¸¶Áö¸·¿¡ ³Ö´Â °ÍÀÌ ÁÁ´Ù.
u È¿¼Ò ¿ø¾×¿¡´Â glycerolÀÌ µé¾îÀֱ⠶§¹®¿¡ Á¡µµ°¡ ³ô¾Æ¼ pipettingÇÒ ¶§ tip ³¡¸¸ »ì¦ ´ã±¸¾î¼ ´ú¾î³»¾î¾ß tip ÁÖÀ§¿¡ È¿¼Ò°¡ ¸¹ÀÌ ¹·¾î³ª¿À´Â °ÍÀ» ¸·À» ¼ö ÀÖ´Ù. ¶ÇÇÑ È¿¼Ò·®ÀÌ ¹ÝÀÀ ÃѾ×ÀÇ 10%¸¦ ³ÑÀ¸¸é È¿¼Ò È°¼ºÀÌ glycerol¿¡ ÀÇÇØ ¾ïÁ¦µÉ ¼ö Àֱ⠶§¹®¿¡ ÁÖÀÇÇØ¾ß ÇÑ´Ù. ÃÑ ºÎÇÇ´Â ´ë°³ 20 ml·Î ÇÑ´Ù.
u È¿¼Ò´Â -20¡ÆC¿¡¼ 50% glycerolÀÌ µé¾îÀÖ´Â ¿ÏÃæ¾×³»¿¡¼ ¾ÈÁ¤ÇÏ°Ô Á¸ÀçÇϹǷΠ¹Ýµå½Ã ³Ãµ¿½Ç¿¡ º¸°üÇÏ°í ½Ç¿Â¿¡
³ëÃâµÇ´Â ½Ã°£À» °¡´ÉÇÑ ÇÑ ÁÙÀδÙ.
2. ±âÆ÷°¡ »ý±âÁö ¾Ê°Ô ÁÖÀÇÇÏ¸é¼ ¼¯´Â´Ù. ¼¯´Â ¹æ¹ýÀº pipetteÀ» up-downÇÏ´Â ¹æ¹ý, ¼Õ°¡¶ô ³¡À¸·Î °¡º±°Ô ÅöÅö Ä¡´Â ¹æ¹ý(tapping), ºÎµå·´°Ô vortexÇÏ´Â ¹æ¹ý µîÀÌ ÁÖ·Î ¾²ÀδÙ. ½ÉÇÏ°Ô vortexÇÏÁö ¾Ê´Â´Ù.
3. ¾à 3~5ÃÊ°£ ¿øħ(brief centrifuge)ÇÏ¿© ¹ÝÀÀÇÒ Àç·áµéÀÌ ¹Ù´Ú¿¡ ¸ðÀ̵µ·Ï ÇÑ´Ù.
4. 37¡ÆC(È¿¼Ò¿¡ µû¶ó¼ ´Ù¸¦ ¼ö ÀÖÀ½)¿¡¼ Àû´ç ½Ã°£ ¹ÝÀÀ½ÃÄÑ DNA°¡ ÃæºÐÈ÷ Àý´ÜµÇµµ·Ï ÇÑ´Ù. ´ë°³ 1~2 ½Ã°£ ¹ÝÀÀ½ÃŲ´Ù.
5. ¹ÝÀÀ¾×¿¡ Àü±â¿µµ¿ ¿ÏÃæ¿ë¾×À» ÷°¡ÇÏ¿© agarose gel Àü±â¿µµ¿À» ½ÃÇàÇÑ´Ù. ¶Ç´Â È¥ÇÕ¾×À» ºÒ È°¼ºÈ ½ÃÅ°±â À§ÇÏ¿© 65¡ÆC·Î 20ºÐµ¿¾È °¡¿Çϰųª 0.5 M EDTA (pH 8.0)À» ÃÖÁ¾³óµµ 10~50 mM µÇµµ·Ï ÷°¡ÇÑ´Ù.
u ºÒÈ°¼ºÈ ¿Âµµ´Â È¿¼Ò¸¶´Ù Á¶±Ý¾¿ ´Ù¸£¹Ç·Î(65~85¡ÆC) Á¦Á¶È¸»çÀÇ ¾È³»¼¸¦ Âü°í ÇÑ´Ù. EDTA ¿ë¾×À» ÀÌ¿ëÇÏ´Â ¹æ¹ýÀº ÀÚ¸¥ DNA¸¦ »ç¿ëÇÏ¿© °ð¹Ù·Î ´Ù¸¥ ¹ÝÀÀÀ» ÇØ¾ß ÇÒ °æ¿ì¿¡´Â ¹ÝÀÀÀ» ¾ïÁ¦ÇÒ ¼ö ÀÖÀ¸¹Ç·Î ÇÇÇÏ¿©¾ß ÇÑ´Ù. ´Ù¸¥ ¹ÝÀÀÀ¸·Î µé¾î°¡´Â °æ¿ì´Â ¹ÝÀÀ¾× ³»¿¡ ÀÖ´Â ´Ü¹éÁú(È¿¼Ò) ¹× saltÀÇ Á¦°Å¸¦ À§Çؼ phenol/chloroform ÃßÃâÀ» ÇÑ ÈÄ ethanol·Î ħÀü½ÃÅ°´Â ¹æ¹ýµµ ÀÖÁö¸¸ DNA ¾çÀÌ ÀûÀ» ¶§´Â ¼Õ½ÇÀÇ ¿ì·Á°¡ ÀÖ´Ù. ÃÖ±Ù¿¡´Â ¿©·¯ ȸ»ç¿¡¼ ÆǸŵǴ DNA purification kit µéÀÌ ÀÖÀ¸¹Ç·Î À̸¦ »ç¿ëÇÏ´Â °Íµµ ÁÁ´Ù. DNA¸¦ ¹Ù·Î Àü±â¿µµ¿ÇÒ ¶§´Â ºÒÈ°¼ºÈ½Ãų ÇÊ¿ä°¡ ¾ø´Ù.
u DNA sampleÀÌ Àß À߸®Áö ¾ÊÀº °æ¿ì ´ÙÀ½°ú °°Àº »çÇ×À» checkÇØ º»´Ù.
1) È¿¼Ò°¡ inactiveÇÏ´Ù. (¿À·¡µÈ È¿¼ÒÀÎ °æ¿ìÀϼö·Ï È°¼ºÀÌ °¨¼ÒÇØ ÀÖÀ» ¼ö ÀÖ´Ù. ±×·¯³ª ¹«¾ùº¸´Ù »ó¿Â¿¡ ¿À·¡ ÀÖ¾ú°Å³ª º¸°ü »óÅ°¡ ºÒ·®ÇÑ °æ¿ì°¡ ¸¹´Ù. ÀÌ °æ¿ì´Â test DNA¸¦ ÇÔ²² Àß¶ó º½À¸·Î½á °Ë»çÇÑ´Ù.)
2) DNA°¡ ¼ø¼öÇÏÁö ¸øÇÏ´Ù. (Salt, polyethylene glycol, protein, EDTA, phenol, SDS, residual ethanol µîÀÌ ³²Àº °æ¿ì ÈçÈ÷ ¹ß»ýÇÑ´Ù. ÀÌ °æ¿ì´Â phenol/chloroform ÃßÃâ-ethanol ħÀü-70% ethanol wash¸¦ ´Ù½Ã ½ÃÇàÇÏ¿© Á¦ÇÑÈ¿¼Ò ó¸®ÇÔÀ¸·Î½á ÁÁÀº °á°ú¸¦ º¼ ¼ö ÀÖ´Ù. ¹ÝÀÀ¾×¿¡ 2 mM spermidineÀ» ÷°¡ÇØ ÁÖ¸é ´õ È¿°úÀûÀÏ ¼ö ÀÖ´Ù.)
3) DNA°¡ ¿ÏÀüÈ÷ ¿ëÇصǾî ÀÖÁö ¾Ê°Å³ª ³Ê¹« Á¡¼ºÀÌ Å©°Å³ª ¶Ç´Â ³Ê¹« ÁøÇÏ´Ù. (ÀÌ·± °æ¿ì´Â Ä¿´Ù¶õ genomic DNA¿¡¼ Àß ¹ß»ýµÈ´Ù. Àß ³ìÀÌ°í ´õ ¹±°Ô ÇÏ¿© ÀÚ¸¥´Ù.)
4) DNA°¡ denaturation µÇ¾îÀÖ´Ù. (Àû´çÇÑ salt³ª MgCl2°°Àº °ÍÀÌ ¾ø´Â »óÅ¿¡¼ 60~70¡Æ
* ¿À¿µ¹Î´Ô¿¡ ÀÇÇؼ °Ô½Ã¹° À̵¿µÇ¾ú½À´Ï´Ù (2004-05-08 18:13)
|